血培养(blood culture),是种将新鲜离体的血液标本接种于营养培养基上,在定温度、湿度等条件下,使对营养要求较高的细菌生长繁殖并对其进行鉴别,从而确定病原菌的种人工培养法。
选用血培养作为诊断试验的最重要目的是,要确诊患者细菌血症或真菌血症,以及后续的病原菌鉴定和测抗菌药物的敏感谱。
血培养指征
可疑细菌感染患者出现以下任一指征时,应采集血培养:
1.体温>38℃或<36℃
2.寒战
3.外周血 WBC 增多(>10.0×109/L,核左移时)或减少(<4.0×109/L)
4.呼吸频率>20次/ min ,或动脉血PaCO2<32mmHg
5.心率>90次/ min
6.血压降低7.皮肤粘膜出血
8.昏迷
9.多器官功能障碍
10.炎症指标如 CRP 、降钙素原( PCT )、1,3-3-D葡聚糖( G 试验)升高等
采集时机
要求
- 对怀疑菌血症患者,在考虑使用抗菌药物之前(药物医嘱执行前),应立即开立化验单、采集血培养标本
- 对于刚入院的危重感染患者,未进行抗菌药物治疗之前,即使体温不高,也应及时采集血培养
- 除特殊情况之外,采取血培养后2-5天内,无需重复采取血培养
说明
- 寒战或发热初起时采集。尽可能在寒和发热初起30分钟﹣1小时内采集血标本,此时血流中病原菌浓度最高
- 不同时间点多次采血,只有在疑似连续性菌血症时才有必要,如感染性心内膜炎或其他血管内感染(如导管相关感染)
血培养标本采集消毒程序
- 皮肤消毒:严格执行三步法(防止皮肤定植菌、过路菌污染)
1.用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待干30秒以上。
2.然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒,从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。
3.最后用75%酒精脱碘,待酒精挥发干燥后采血。
- 新生儿及对碘过敏的患者,只能用75%酒精消毒60s,待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血
- 培养瓶消毒程序
1.用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,作用60秒自然干燥后,然后注入。
2.不能用含碘消毒液。
血培养标本采集注意事项
要求
- 严格无菌操作,不允许在皮肤消毒后用手按压静脉,除非带有无菌手套
- 不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头,采用真空采血装置能降低污染率
说明
- 无论采用何种采血方法,血培养可接受的污染率通常是≤3%
- 研究表明,经过专门培训的熟练抽血者采集血培养的污染率为3%,而未经培训的住院医生和护士污染率则达11%
- 对护士就血培养标本采集进行专门、严格的培训是非常必要的
采集部位
- 外周血
- 从两侧上肢静脉(肘静脉)采血
- 疑似左侧感染性心内膜炎,采集肘动脉或股动脉更好
- 不建议常规采集动脉血,其诊断价值不比静脉血更大
- 严禁从静脉三通处肝素帽取下后采集血培养标本
- 常规血培养不宜从血管留置导管或血管留置装置中采集,除非怀疑或需要排除导管相关血流感染
血管内导管标本
1.经导管采血培养
- 留置导管采血培养只是在评估导管感染时需要.应由导管近端严格消毒后经穿刺抽取血液
- 同时须抽另一侧外周静脉血进行另外一套血培养
2.导管末端培养(拔除导管)
- 75%乙醇消毒导管周围皮肤,拔出整条导管后用无菌剪刀取下体内段末端约5cm长度,置于无菌容器中送检
- 如不能作床旁接种,可将导管置含有少量生理盐水的无菌试管内送检
- 不应将剪下的导管体内段置肉汤增菌液增菌,导致假阳性
导管标本的实验室处理
- 实验室应将体内段导管立即置血平上作滚动涂布接种,置35℃培养8~24h,观察有无细菌生长
- 如细菌菌落数≥15 CFU / Tip 即为阳性,则认为血流感染是可能与导管有关
- 但滚动涂布接种多只能检测导管外壁粘附定植细菌
- 继发性导管相关感染,常见于原发感染灶释放入血或透过肠粘膜屏障入血,细菌在导管腔内壁粘附生长更常见,滚动涂布接种可能阴性。须在无菌生理盐水超声震荡后取震荡液培养
采集套数
- 同时或间隔短时间内采集2套,即"双瓶双侧”(每套包括1只普通血培养瓶及1只厌氧血培养瓶)
- 必要时从下肢静脉采血做第三套血培养
- 研究表明,血培养2套和3套的检出率显著高于只做1套的检出率
- 至少“双侧两瓶”,即从一个部位采血接种一个需瓶,再从另一部位采血接种另一个厌氧瓶
- 一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养
- 儿童厌氧菌感染机会不高,通常只需采集需氧瓶
采血量及标本运送
采血量
- 自动化血培养仪要求成人8-10ml/瓶,儿童1-5mI/瓶
- 成人血培养采血量在2~30m之间,病原菌检出率与采血量成正比例
- 每增加1ml的血液,病原菌的检出率大约增加3.2%,假阳性也有可能随之提高
- 儿童患者因为血液中病原菌浓度较高,采血量不需与成人等同
- 血液病患者或者血容量相对较低患者,建议使用儿童瓶来减少血液的采集量、增加病原菌的检出率
- 当采血量少于推荐值时,必须首先满足需氧瓶,将剩余血接种入厌氧瓶
采集后立即送微生物实验室放入培养箱,最好1h内
否则,应20-25C室温保存,原则上也不应超过12小时,切勿冷藏
血培养的报告周期
- 95%-97%的有临床价值的细菌会在3-4天内被自动血培养系统检出,目前仍推荐5天的培养周期
- 其实绝大多数细菌在24小时内阳性报警,真菌相对延缓一天,3-5天出最终报告
- 自动化血培养仪的标准血培养周期为5天特殊情况可适当延长培养时间
- 如临床怀疑布鲁菌感染,可延长培养至28天等
建议
1.当血培养至24 h 后仍为阴性,不考虑革兰阴性菌感染,针对 G +进行选择用药;
2.当血培养至48 h 后仍为阴性而临床感染症状明显,高度怀疑为念珠菌性血流感染;
3.当血培养72 h 后仍为阴性,而患者临床表现良好,可停止应用抗菌药物。